Zu Beginn seiner Ausstrahlung versuchte sich ProSieben vor allem als Spielfilmsender zu profilieren und zeigt hochkarätige Free-TV-Premieren großer Hollywood-Filme. Dazu kamen amerikanische (inzwischen Kult) Serien wie "Die Simpsons", "The Big Bang Theory" oder "Two and a Half Men", die auch ständig als Wiederholung laufen.
Für das junge Publikum sicherte sich der Sender die Zusammenarbeit mit den beliebten Pro Sieben TV-Star Joko Winterscheidt und Klass Heufer-Umlauf. Diese hatten u.a. die Late Night Show "Circus Halligalli" (erhielt 2014 sogar den Grimme-Preis), "Joko gegen Klaas – Das Duell um die Welt" und seit 2020 "Joko & Klaas gegen ProSieben".
Seit 2013 gibt es den Ableger ProSieben Maxx, der sich vor allem an männliche Zuschauer richtet. Gemeinsam mit SAT.1, kabel eins und sixx und anderen kleineren Spartensendern bildet Pro7 die ProSiebenSat.1 Media SE.
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